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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

放射形根瘤菌α-GST (α-glutathione S-transferases) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizobium  radiobacter

細黃鏈霉菌CAPA (Cytotoxin Associated Protein A) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces microflavus

微小桿菌屬ANG II R1-Ab (Angiotensin II Receptor 1 Antibody) ELISA Kit 拉丁屬名: Exiguobacterium sp.

Pseudofusicoccum stromaticumGAS (N-Acetylgalactosamine 6-Sulfatase) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

米色擲孢酵母PYY (Peptide YY) ELISA Kit拉丁屬名: Sporobolomyces oryzicola

釀酒酵母TAF13 (TATA Box Binding Protein Associated Factor 13) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

瑟氏泰勒蟲（兩當株）ASK-1 (Apoptosis Signal Regulating Kinase 1) ELISA Kit拉丁屬名: sergenti

淡紫灰鏈霉菌產(chǎn)褐色變種MIA1 (Melanoma Inhibitory Activity Protein 1) ELISA Kit用途: 分類 研究

藤倉鐮孢Neopterin ELISA Kit拉丁屬名: Fusarium fujikuroi

FlavihumibacterSEMA3A (Semaphorin 3A) ELISA Kit拉丁屬名: Flavihumibacter  petaseus

枯草芽孢桿菌VDR (Vitamin D Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

金針菇SPD (Pulmonary Surfactant Associated Protein D) ELISA Kit 拉丁屬名: Collybia velutipes (Curt.: Fr.) Quél.

茶擬盤多毛孢LEPR (Leptin Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Pestalotiopsis theae

西唐氏鏈霉菌DEFα5 (Defensin Alpha 5, Paneth Cell Specific) ELISA Kit用途: 產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性

胡椒枯萎病TE (Telomerase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
里氏埃里希氏體探針法熒光定量PCR試劑盒供應商CDH11/OB-Cadherin  鈣粘附蛋白-11抗體苦瓜素 I3β,7β,23-Trihydroxycucurbita-5,24-dien-19-al化學標準品 分 子 式: C30H48O4 分 子 量: 472.69972

Lin-28B  RNA結(jié)合蛋白LIN28B抗體楊梅醇Tricyclo[12.3.1.12,6]nonadeca-1(18),2,4,6(19),14,16-hexaene-3,9,15-triol,16,17-dimethoxy-, (9R)-對照藥材 分 子 式: C21H26O5 分 子 量: 358.42814

HSP1/Protamine P1  精子魚精蛋白P1抗體二萜酸甲酯Clerodermic acid methyl ester對照藥材 分 子 式: C21H30O4 分 子 量: 346.4605

EGR3  早期生長反應蛋白3抗體茯苓酸Pachymic acid中藥標準品  分 子 式: C33H52O5 分 子 量: 528.76298

SOX10  轉(zhuǎn)錄因子SOX10抗體薔薇酸,'野鴉椿酸Urs-12-en-28-oic acid,2,3,19-trihydroxy-, (2a,3a)-對照藥材 分 子 式: C30H48O5 分 子 量: 488.69912

PMCA4/Calcium Pump PMCA4 ATPase  細胞膜鈣ATP酶4抗體甘草酸單鉀鹽a-D-Glucopyranosiduronic acid, (3b,20b)-20-carboxy-11-oxo-30-norolean-12-en-3-yl 2-O-b-D-glucopyranuronosyl-, potassiumsalt (1:1), (3b)-中藥標準品  分 子 式: C42H61O16-.K+ 分 子 量: 861.022440000001

phospho-ER-beta(ser105)  磷酸化雌激素受體β抗體乙烯硫脲Imidazolidine-2-thione化學標準品 分 子 式: C3H6N2S 分 子 量: 102.15814