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客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：

普通變形桿菌SMN1 (Survival Of Motor Neuron 1, Telomeric) ELISA Kit  拉丁屬名: vulgaris

橙鱗傘2SYP (Synaptophysin) ELISA Kit  注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

北里胞菌SNAP-25 (Synaptosome Associated Protein 25) ELISA Kit拉丁屬名: Kitasatosporia sp.

羊無(wú)漿體（青海海宴株）SYT1 (Synaptotagmin 1) ELISA Kit   拉丁屬名: ovis

鮑姆針層孔菌SDC4 (Syndecan 4) ELISA Kit  注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌SNCa (Synuclein, Alpha) ELISA Kit  拉丁屬名: Bacillus  subtilis

鼠李糖乳桿菌TACR1 (Tachykinin Receptor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Lactobacillus rhamnosus

棘孢曲霉TACR2 (Tachykinin Receptor 2) ELISA Kit  拉丁屬名: Aspergillus  aculeatus

釀酒酵母TLN (Talin) ELISA Kit  拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

類(lèi)阿達(dá)青霉THP (Tamm–Horsfall Glycoprotein) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium  adametzioides

帶小棒鏈霉菌TDP43 (TAR DNA Binding Protein 43) ELISA Kit  拉丁屬名: Streptomyces clavuligerus

都柏林克羅諾桿菌都柏林亞種TRACP-5b (Tartrate-Resistant Acid Phosphatase 5b) ELISA Kit拉丁屬名: Cronobacter dublinensis subsp. dublinensis

球孢白僵菌TBP (TATA Binding Protein) ELISA Kit  拉丁屬名: Beauveria bassiana

Sphingomonas abaciTAF1 (TATA Box Binding Protein Associated Factor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Sphingomonas abaci

大腸埃希菌TAF2 (TATA Box Binding Protein Associated Factor 2) ELISA Kit  拉丁屬名: coli
雞病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒規(guī)格Nkx2.5/Cardiac-specific homeobox 1  特異性同源盒轉(zhuǎn)錄因子NKX2.5抗體Tafluposide(5R,*R,8aR,9S)-5-[3,5-Dimethoxy-4-(phosphonooxy)phenyl]-9-[4,6-O-[(R)-ethylidene]-2,3-bis-O-(pentafluorophenoxymethylcarbonyl)-beta-D-glucopyranosyloxy]-5,*,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphtho[2,3-d][1,3]dioxol-6-one化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C45H35F10O20P 分 子 量: 1116.7052

ADORA1  腺苷A1A受體抗體古倫賓(1R,2S,3S,5S,8R,11R,12R)-5-(3-Furyl)-12-hydroxy-3,11-dimethyl-6,14-dioxatetracyclo[10.2.2.02,11.03,8]hexadec-15-ene-7,13-dione中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C20H22O6 分 子 量: 358.38508

AMP deaminase 1  腺苷單磷酸脫氨酶1抗體鹽酸普羅托平; 鹽酸藍(lán)堇堿Bis[1,3]benzodioxolo[4,5-c:5',6'-g]azecin-13(5H)-one,4,6,7,14-tetrahydro-5-methyl-, hydrochloride (1:1)化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C20H19NO5.HCl 分 子 量: 389.8295

A2AR/Adenosine A2a receptor  腺苷A2A受體抗體重樓皂苷IPolyphyllin A中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C44H70O16 分 子 量: 855.017000000001

AACT-Alpha1/A1ACT  α-1抗胰糜蛋白酶抗體赤芝酸CLucidenic acid C中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C27H40O7 分 子 量: 476.602

AAK1  AP2關(guān)聯(lián)激酶1抗體橙黃決明素-6-葡萄糖苷中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式:  分 子 量:

Cyp2-j3  細(xì)胞色素P450Ⅱj3抗體丙二酸Malonic acid中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C3H4O4 分 子 量: 104.06146